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Elisa常見問題問答:

(1)問:小鼠乙酰膽堿Elisa試劑盒后期數據處理中空白的OD值有什么作用?

         答:可以將標準品和樣本的OD值同時減去空白的值進行計算,或者都不減,保持同一水平就行。 

(2)問:那我們算出來的ACH含量為什么出現負值?

         答:說明個別樣本的濃度很低,當濃度接近第6個點的時候,直線方程就有可能計算出負值。

(3)問:小鼠乙酰膽堿ELISA試劑盒,組織標本 切割標本后能用生理鹽水稀釋嗎?還有稀釋的倍數是多少?

         答:生理鹽水也可以,加入量1:3。

(4)問:我想問一下,標準品濃度與標準品吸光度值之間是不是線性回歸?檢測出來的吸光度值很低一般都存在哪些原因?大部分在0.08左右 ?(大鼠5羥色胺(5-HT)Elisa試劑盒)

         答:是線性回歸。檢測出來的值比較低 ,樣本、稀釋、操作等,原因很多,但只要在可操作范圍就行 。 

(5)問:做出來的結果:標準品的吸光度呈線性回歸,但是樣品的吸光度都和本體吸光度值接近,正常未予干預的大鼠血漿都基本沒有5-HT 表達,這是什么原因?(大鼠5羥色胺(5-HT)Elisa試劑盒)

         答:樣本、稀釋、室控和機器操作等,原因都可能造成吸光度都和本體吸光度值接近,好像熒光法里面有種試劑盒可以檢測滴度。

(6)問:Elisa試劑盒的使用的方法是什么???

         答:采用雙抗夾心法 (目前暫行)

(7)問:一個孔需要多少量的血清?

         答:一個孔上樣量10-50微升。

(8)問:未處理的樣本我需要郵寄多少的量?

         答:每個孔需要100ul

(9)問:樣本怎么保存?

         答:當天要用的樣本保存4℃,隔天樣本-20℃(近期一個月左右要用的樣本),長期保存樣本-70℃(一年或者更長時間多久都可以用),避免反復凍融。

(10)問:EP管是什么管?

           答:離心管。

(11)問:收集血清的時候用什么管?

           答:普通離心管即可。

(12)問:96t可以檢測多少個樣本?48t可以檢測多少個樣本?

           答:96t標準的可以檢測85個樣本,其他有10個標準品孔,1個空白對照。96t單孔可以檢測90個樣,7個標準品控 1個空白對照。48t標準的可以檢測37個樣本,其他有10個標準品孔,1個空白對照。48t單孔可以檢測40個樣本,其他有7個標準品孔,1個空白對照。

(13)問:標準的檢測85個樣本的和單孔相比, 有什么好的地方嗎?

           答:標準的檢測又叫復孔檢測,標準的檢驗重復性測的結果好,所以大家都叫復孔是標準的檢測。

(14)問: 酶標板分次使用 剩下的建議怎么保持 ?

           答:要是真的用不完或標本不多的情況下。做點處理后:板條和板架都是可拆卸的,可以再用之,前拆下4條放置錫箔袋或其他無污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。

(15)問:酶標包被版是酶標板嗎?

           答:是的。

(16)問:請問植物茉莉酸和水楊酸檢測的試劑盒,我們提取擬南芥的,一般取樣量是多少?

           答:1-3g。

(17)問:大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA,大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5B),我發現試劑盒里缺少標準品稀釋液,沒有它我的實驗無法進行,盒子里面有特殊稀釋液是用來稀釋樣品的,但都沒有標準品稀釋液,我的樣品已超出最低檢測限,所以需要稀釋標準品才行嗎?

           答:特殊稀釋液是用來稀釋標準品的,特殊稀釋液一般情況不用當樣本濃度特別高是先用特殊稀釋液稀釋,標準品需要再稀釋就也要用特殊稀釋液。

(18)問:測出來的標準曲線值前面幾盒都是0.98 才正常,后面怎么變成0.93了?

           答:某個點偏離大可以去掉,保留5個點

(19)問:是不是空白對照就是什么都不加?

           答:不加樣本,不加樣本稀釋液,不加酶標試劑 其他都可以加。

(20)問:樣本稀釋液是配好的嗎?

           答:樣本稀釋液是配好的

(21)問:樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎?

           答:可以,直接加40ul就可以。

(22)問:檢測的時候需要在操凈臺中操作嗎,還是在外面操作就可以了?

           答:要求不是很嚴格,根據自己實驗室的設備而定,都可以。

(23)問:人和肽素(copeptin)Elisa,洗滌液是濃縮的,是一次配好,還是現配現用?

           答:濃縮的,現配現用。

(24)問:Elisa方法的不測人血小板第四因子里IgG抗體的滴度嗎?

           答:Elisa不測滴度的,熒光法可以測。

(25)問:酶標板不平,影響結果嗎?

           答:不影響結果的。

(26)問:小鼠TNF-α ELISA 我的標本是細胞,我想要測的結果:抑制TNF的產生  空白組、模型組、藥物組,藥物組要成梯度抑制TNF的產生、請問Elisa方法的可以測嗎?

           答:細胞可以測 但要分組,得到相應的梯度值,計算結果。自己需要多查閱文獻 。

(27)問:人睪酮(T)Elisa,人雌三醇(E3)Elisa,是用什么酶標記的?

           答:辣根酶標記的  標本里不能加疊氮化鈉

(28)問:我測植物水楊酸,標本是煙草葉片怎么處理的?那上清液檢測SA時,還需要用甲醇抽提嗎?

           答:稱取煙葉500mg,研磨成粉末狀,加入5ml濃度為0.01mol,PH值為7.4的PBS溶液,充分勻漿,離心取上清液(3000-4000轉,15分鐘左右),分裝保存,一般需要長期保存需放在-80度,或者液氮中,備用,不用加甲醇。

(29)問:沒有做出標準曲線來,你知道什么原因嗎?

           答:操作肯定有問題,做之前把標準品搖勻下。

(30)問:買同一個指標的幾個盒子,用不用都做標準曲線?

           答:如果同一個指標買了3盒,建議每盒都做個標曲。同一個盒子 ,即使分幾次用,做一個標曲也行了,因為數值不會偏差太大,差不多。

(31)問:那個特殊稀釋液是做什么的?

           答:一般情況都不要用的,他的最大的用途就是稀釋標準品。但是,現在標準品已經稀釋好了,所以不需要用了。如果你需要更多的標準品的話,可以用他來稀釋。

(32)問:你們的試劑盒什么成分是進口的 什么事國產的?板子酶標和抗體是國產的還是進口的?

           答:抗體、酶標試劑、酶標板都是進口的、其他試劑是國產 嚴格按照國際標準操作完成 呵呵 

(33)問:比如說我偶然發現只加樣本稀釋液的也出現淺黃色,這怎么解釋呢?

           答:可能的原因是:洗板時有交叉感染。樣本稀釋液中本身有本底的一個較小的讀數。也是ELISA的一個局限性,免疫的很多反應稀釋液 洗滌液發揮了很重要的作用,不加的話效果不明顯,但是加了以后有些成分可能有一部分的干擾作用,可以比較不同的廠家的盒子 都存在這些局限性的,但不影響最終的結果,ELISA嚴格的說就是一個半定量的方法。

(34)問:那標準品出現跳孔是怎么回事?

           答:你完全可以拿同樣的標準品再重新做一次 ,做之前搖勻一下,肯定可以做好 。那是操作問題了 ,你可以再做一次的,之前也有客戶出現過類似的問題,學生做了2次都沒做好,后來老師自己做,就是搖勻了一下,其他操作都一樣,標準曲線做的很完美。

(35)問:建議標準做復嗎?

           答:標準品做復孔是最好的

(36)問:血清和腸道粘膜勻漿上清,可以用一個盒子嗎?

           答:可以!

(37)問:36個樣品,定96T的,可以測一個重復吧

           答:可以

(38)問:不同盒子里的孔下次能不能用?

           答:一個盒子有96孔和48的 要是真的用不完或標本不多的情況下,做點處理后在存放。

(39)問:什么叫點處理?

           答:板條和板架都是可拆卸的,可以再用之前拆下4條放置錫箔袋或其他無污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。

(40)問:不同批的試劑能不能用?

           答:同樣的盒子不同的批號或是同一個批號,也是不建議混用的。同樣的盒子,分兩次的結果應該是不一樣的,但數據部應相差太大,應在可控制或接受范圍。

(41)問:為什么不建議混用?

           答:不同批號的不可以混用 原因很簡單若不同批號的混用的話 可能得出的結果不是您想要的 數據可能偏差較大

(42)問:測細胞內的蛋白的話怎樣處理樣本 ?

           答:ELISA實驗前需對標本進行處理將目的蛋白釋放出來,其他按常規方法處理即可。

(43)問:代測可以直接接受沒有處理好的樣品嗎?

           答:可以

(44)問:每個肌肉和肝臟樣本,最少需要多少克?

           答:1克就可以了。

(45)問:96T的一次用不完,40天以后再用,如何存放?

           答:標準品放-20度 ,其他放4度,并且板條要密封好。

(46)問:標曲做兩個重復少不少?

           答:不少。

(47)問:試劑盒不同批次會對實驗結果有影響嗎?

           答:有一定的影響,但是影響不是很大。

(48)問:能不能直接用軟件分析數據呢?

           答:可以,用EXCEL或者用SPSS等統計軟件。

(49)問:是不是空白就是什么都不加嗎?

           答:空白不加樣本,不加樣本稀釋液 ,不加酶標試劑,其他都可以加。

(50)問:你們這個試劑盒要多少上樣量?

           答:上樣量沒有什么限制, 每個孔的上樣量是10ul。

(51)問:我兩個空白孔一個啥都不加,一個加了后面的A液,B液還有終止液, 請問用哪一個?

           答:用加了A液,B液還有終止液的那個更加準確,因為樣本都加過這些,可以排除相應的干擾。

(52)問:離心完以后用什么管子保存?

           答:離心完用EP管保存就可以。

(53)問:收集病人血液標本的時候用什么管?

           答:用普通的離心管收集就可以

(54)問:抗體和底物都是進口的吧?

           答:是的,底物就是TMB 進口的。

(55)問:測的是不同的物質為什么測的波長一樣呢?

           答:ELISA的波長全是450, 這就是ELISA,不一樣的話,那就是比色法了,不是ELISA。組織勻漿后就可以檢測。

(56)問:說明書寫要7個標準品是做什么用?

           答:7個標準品,只要6個,第七個是空白對照 。 

(57)問:抗凝劑可以用EDTA嗎?或者加什么做為抗凝劑?

           答:可以,肝素或者EDTA。

(58)問:Elisa代測結果表格每組表達什么?

           答:S1-S5 代表 標準品第一個表格是吸光度 第二個是對應表 第三個是數據處理(是根據標準品那個線性關系出來的)第四個表最終結果是都乘以5得到的問:為什么×5?答:因為我們做的時候是10ul樣本+40ul樣本稀釋液做的 問:那個U是代表什么?答:U是調零的,什么都不加。 

(59)問:為什么檢測結果最終結果單位表達不一樣?

           答:ng/ml是質量單位, pmol/L是濃度單位,一般是沒法換算的,在采購試劑盒時請用戶說明單位,1ng/ml = 1000pg/ml。

 

 

 


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